Identificación bacteriana empleando PCR-DGGE en leche de vacas con mastitis de un rebaño mestizo Gyr-Holstein.
Municipio Obispo Ramos de Lora, Mérida, Venezuela.
Palabras clave:
bacterias, mastitis, cultivo negativo, PCR-DGGEResumen
Con el objetivo de caracterizar las bacterias presentes en muestras de leche mastíticas de vacas Girolando (Mestizas Holstein-Gyr), procedentes de un rebaño con una historia de mastitis clínica de 6 meses y baja en la producción lechera, se empleó la técnica PCR-DGGE usando como marcador la región V3 del ADNr 16S, la cual es una metodología independiente de cultivo bacteriológico. La valoración de mastitis sub clínica se realizó por medio de CMT y las muestras se tomaron de vacas que tenían al menos 4 semanas sin terapia antibiótica. Las alícuotas fueron usadas para bacteriología e identificación molecular. Solo se seleccionaron las muestras negativas a cultivo para hacer la PCR-DGGE. El valor de mastitis sub-clínica por CMT al momento de la toma de muestra fue de 48.07% (225 cuartos). El PCR-DGGE permitió evidenciar la presencia de varios tipos de bacterias en las muestras estudiadas, las cuales se relacionaron más estrechamente a bacterias de los filos Firmicutes y Proteobacterias, donde destacó la presencia del género Acinetobacter. Muchos de estos microorganismos están implicados en multi-resistencia antibiótica, por lo cual la técnica se convierte en una herramienta útil para analizar estas poblaciones microbianas en vacas con mastitis clínica y cultivo negativo y establecer mejores medidas de control y prevención contra esta patología en las fincas lecheras. Se requieren otros estudios para establecer las posibles implicaciones de los microorganismos aislados sobre la salud humana y animal.
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Citas
Dingwell, R., Leslie, K., Schukken, Y., Sargeant, J y Timms, L (2003). “Evaluation of the California mastitis test to detect an intramammary infection with a major pathogen in early lactation dairy cows”. The Canadian Veterinary Journal, 44(5), 413.
Dmitriev, A., Bhide, M., y Mikula, I. (2006). “cpn60 gene-based multiplex-PCR assay for simultaneous identification of Streptococcal species”. Acta Veterinaria Brno, 75(2), 235-240.
Farías Reyes, José., García Urdaneta, A., D’pool, G., Valero Leal, K., Allara, M y Angelosante, G. (2005). “Detección de mastitis subclínica en bovinos mestizos doble propósito ordeñados en forma manual o mecánica. Comparación de tres pruebas diagnósticas”. Revista Científica, 15(002).
Ferraro, L., Scaramelli, A., Troya, H.(1999) “Prevalencia de la mastitis sub-clínica bovina en Venezuela y evaluación de la prueba de mastitis de California (CMT) como prueba diagnóstica”. Revista Científica. 9, (2), 81-90.
Graber, H. U., Casey, M. G., Naskova, J., Steiner, A., y Schaeren, W. (2007). “Development of a highly sensitive and specific assay to detect Staphylococcus aureus in bovine mastitic milk”. Journal of dairy science, 90(10), 4661-4669.
Kuang, Y., Tani, K., Synnott, A. J., Ohshima, K., Higuchi, H., Nagahata, H y Tanji, Ya. (2009). “Characterization of bacterial population of raw milk from bovine mastitis by culture-independent PCR–DGGE method”. Biochemical Engineering Journal, 45(1), 76-81.
Kuehn, J, Gorden, P., Munro, D., Rong, R., Dong, Q., Plummer, P y Phillips, G. (2013) “Bacterial community profiling of milk samples as a means to understand culture-negative bovine clinical mastitis”. PloS one, 8(4), e61959.
Klostermann, K., Crispie, F., Flynn, Ja., Ross, P., Hill, C y Meaney, W. (2008). “Intramammary infusion of a live culture of Lactococcus lactis for treatment of bovine mastitis: comparison with antibiotic treatment in field trials”. Journal of dairy research, 75(03), 365-373.
Lockhart, S, Abramson, M., Beekmann, S., Gallagher, G., Riedel, St., Diekema, Daniel y Doern, G. (2007). “Antimicrobial resistance among Gram-negative bacilli causing infections in intensive care unit patients in the United States between 1993 and 2004”. Journal of clinical microbiology, 45(10), 3352-3359.
Melchior, M. B., Vaarkamp, H., y Fink-Gremmels, J. (2006). “Biofilms: a role in recurrent mastitis infections? The Veterinary Journal, 171(3), 398-407.
Muyzer, G, De Waal, E y Uitterlinden, A. (1993). Profiling of complex microbial populations by denaturing gradient gel electrophoresis analysis of polymerase chain reaction-amplified genes coding for 16S rRNA”. Applied and environmental microbiology, 59(3), 695-700.
Nam, H. M., Kim, J. M., Lim, S. K., Jang, K. C., y Jung, S. C . (2009). “Prevalence and antimicrobial susceptibility of gram-negative bacteria isolated from bovine mastitis between 2003 and 2008 in Korea”. Journal of dairy science, 92(5), 2020-2026.
Nam, H. M., Kim, J. M., Lim, S. K., Jang, K. C., y Jung, S. C. (2010). “Infectious aetiologies of mastitis on Korean dairy farms during 2008”. Research in veterinary science, 88(3), 372-374.
Olson, M., Ceri, H., Morck, D., Buret, A y Read, R. (2002). “Biofilm bacteria: formation and comparative susceptibility to antibiotics”. Canadian Journal of Veterinary Research, 66(2), 86.
Rea, M., Cogan, T. M., Y Tobin, S. (1992). “Incidence of pathogenic bacteria in raw milk in Ireland”. Journal of Applied Bacteriology, 73(4), 331-336.
Rebhun, W., Guard, Ch y Richards, C. (1995). Diseases of dairy cattle. Williams and Wilkins.
Scaramelli, A y González, Z. (2005). Epizootiología y diagnóstico de la mastitis bovina. Disponible desde Internet en: http://avpa. ula. ve/docuPDFs/libros_online/manualganadería/seccion5/articulo 9_s5. pdf (con acceso 20/07/09).[Links].
Sol, J., Sampimon, O. C., Snoep, J. J., y Schukken, Y. H. (1997). “Factors associated with bacteriological cure during lactation after therapy for subclinical mastitis caused by Staphylococcus aureus”. Journal of dairy science, 80 (11), 2803-2808.
Suniaga, J., Rojas, G., Hernández, J., Caamaño, J., Urbina, A. y Tovar, L. (2009). “Estudio de prevalencia de mastitis subclínica en la zona alta del estado Mérida”. Universidad de Los Andes (Venezuela). Instituto de Investigaciones Agropecuarias.
Watts, J. L.(1988). “Etiological agents of bovine mastitis. Veterinary microbiology”, 16(1), 41-66.
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